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抗丁型肝炎病毒IgM抗體-檢查項目-大眾養生網

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抗丁型肝炎病毒IgM抗體

基本信息

  • 專科分類： 傳染病檢查
  • 檢查分類： 肝功能檢查
  • 適用性別： 男女均適用
  • 是否空腹： 　空腹
  • 手術參考價： 40元
  • 科　室： 傳染病檢查

抗丁型肝炎病毒IgM抗體檢查簡介

HDV為缺陷病毒，依賴HBsAg才能復制，表現為HDV、HBV同時或重疊感染，其傳播途徑主要是生活接觸，也可通過血液制品、輸血、注射等途徑傳播。其實驗室檢查主要是檢測抗原和抗體。

抗丁型肝炎病毒IgM抗體檢查過程

化驗取材：血液

抗丁型肝炎病毒IgM抗體的測定原理：根據免疫學中抗原，抗體之間的特異性結合的原理，利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待檢血清中的IgM，然后加入丁型肝炎病毒抗原（HDAg）使之與血清中IgM抗HDV抗體結合，然后利用酶標記的抗-HDVIgG，它即具有與HDAg相互反應的免疫學特異性，又具有酶的催化，放大活性。當加入相應底物后，酶使底物氧化（HRP）或水解（AKP）從而使無色底物變為有色。利用顏色的深淺或A值的高低確定IgM抗HDV抗體的有無和含量的高低。

試劑：

（1）聚苯乙烯塑料板：40孔或96孔板，進口或國產。

（2）可變微量加樣器：20μl，100μ1各1支。

（3）抗人IgM（μ鏈）：鼠抗人IgM單克隆抗體或兔（羊）抗人IgM多克隆抗體。

（4）IgM抗HD陰性，陽性對照血清。

（5）HDAg：大腸桿菌表達的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度：1∶640～1∶1280。

（6）HPR-抗HDVIgG：應用改進的過碘酸鈉法標記抗HDVlgG多克隆抗體，使用稀釋度1∶400～1∶4000（于10%小牛血清的PBS液中）。

（7）包被液：0.05mol/LpH9.5～9.6的碳酸鹽緩沖液（Na2CO315.9g，NaHCO329.3g加水到1000ML，1∶10稀釋使用）。

（8）洗液：0.01mol/LpH7.2～7.4PBST（內含8.5G/LNaCL，0.5‰Tween20）。

（9）稀釋液：0.01mol/LpH7.2～7.4PBS。用于稀釋和標記抗體。

（10）底物液：用前新配制。4mg鄰苯二胺（OPD）+10ml基質液（pH5.0磷酸，檸檬酸緩沖液，即Na2HPO418.4g、檸檬酸5.1g溶于1000ml離子水中4℃保存備用）待溶化后加3%H2O250μl混合均勻后立即使用。

（11）終止劑：2mol/LH2SO4。

操作方法：

（1）用0.05mol/LpH9.5～9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋抗人IgM單克隆抗體，包被聚苯乙烯板，每孔100μl，放4℃過夜。

（2）用PBST洗3次（中間不停留）拍干。

（3）每孔分別加入100μl1∶1000稀釋后的待檢血清和陰、陽性對照血清（陰性對照3孔，陽性對照2孔）放37℃1h。

（4）負壓下用PBST洗板3次（方法同上）抽干（將血清和廢液抽到消毒瓶內防止污染環境）。

（5）每孔加入50～100μl經適當稀釋后的HDAg（2～4個ELISA單位）放45℃1h。

（6）洗3次后，每孔加入50μlHRP-抗-HDVIgG抗體（于含1%小牛血清的PBS中）放42～45℃1h。

（7）洗3次后，加50μl新鮮配制的底物液，放室溫暗處顯色15～30min，當陽性對照顯黃色后，每孔加入1滴（25μl）2mol/LH2SO4終止反應。

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