三級甲等綜合醫(yī)院國營
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化驗(yàn)取材:血液
抗溶血性鏈球菌“O”試驗(yàn)的原理:鏈球菌溶血素O對氧不穩(wěn)定,在空氣中迅速失去溶血活力,檢測ASO時(shí),先將鏈球菌溶血素O還原,恢復(fù)其溶血活力,再與不同稀釋度的病人血清混合,繼加O型紅細(xì)胞或兔紅細(xì)胞懸液作為指示劑。如溶血素O被血清中的相應(yīng)抗體所中和,則加入的指示紅細(xì)胞不被溶解。如血清中無相應(yīng)抗體或抗體量不足以中和加入的溶血素,則發(fā)生不同程度的溶血現(xiàn)象。
試劑:
(1)溶血素O:有商品供應(yīng),按說明書稀釋后使用,溶血素O活性(結(jié)合單位)的標(biāo)定必須用丹麥國立血清研究所制備的WHO標(biāo)準(zhǔn)抗溶血素O抗體精確滴定。溶血素O對熱不穩(wěn)定,短期保存可存放于4~10℃冰箱,幾個(gè)月以上應(yīng)低溫冰凍貯存。
(2)ASO緩沖液:取磷酸氫二鈉十二水合物9.06g,磷酸二氫鈉二水合物10.89g,氯化鈉4.6g,使溶于少量蒸餾水后并補(bǔ)足至1000ml,pH值為6.5。
(3)紅細(xì)胞懸液:取枸櫞酸鈉抗凝的兔或O型人血,用ASO緩沖液洗滌3次,最后1次洗滌后,必須經(jīng)2000r/min離心10~15min,離心后盡可能吸盡無色的上清液,并以ASO緩沖液配制成5%懸液,用時(shí)輕輕搖勻。
(4)還原劑:商品還原片劑可按說明書使用,其主要成分是2∶1的無水亞硫酸氫鈉和無水亞硫酸鈉。也可在臨用前將ASO緩沖液以2mol/L氫氧化鈉校pH值到8.0,加入L-半胱氨酸鹽7g/L使溶解即成。
操作方法:
(1)用ASO緩沖液將血清標(biāo)本稀釋成1∶100和1∶500二個(gè)稀釋度。
(2)按說明書建議配制1結(jié)合單位/ml的還原溶血素O,準(zhǔn)確吸取一定量溶血素,首先用還原劑溶液稀釋到最終體積的1/3左右,放置15min,使溶血素充分還原,然后準(zhǔn)確稀釋到指定體積,在45min內(nèi)使用。
(3)取70×100mm小試管,并以已知ASO單位的標(biāo)準(zhǔn)血清作對照。
(4)結(jié)果報(bào)告:主要觀察上清液是否有溶血現(xiàn)象,以呈完全不溶血的血清最高稀釋倍數(shù)為該標(biāo)本的ASO單位/ml。
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