三級甲等綜合醫院國營
北京協和醫院是集醫療、教學、科研于一體的現代化綜合三級甲等醫院,是國家衛生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫療任務的醫院之一,也是高等醫學教育和住院醫師規范化培訓國家 級
(一)蛋白質樣品獲得:細菌誘導表達后,可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞,真核細胞加勻漿緩沖液,機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000g離心15min。取上清液作為樣品。
(二)電泳:制備電泳凝膠,進行SDS-PAGE。
(三)轉移:(半干式轉移)
1、電泳結束后將膠條割至合適大小,用轉膜緩沖液平衡,5min×3次。
2、膜處理:預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜,浸入轉膜緩沖液中10min。
3、轉膜:轉膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好,濾紙、凝膠、NC膜精確對齊,每一步去除氣泡,上壓500g重物,將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2,轉移1.5hr。轉移結束后,斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脫色,至背景清晰,然后用雙蒸水洗,風干夾于兩層濾紙中保存,留與顯色結果作對比。
(四)免疫反應:
1、用0.01MPBS洗膜,5min×3次。
2、加入包被液,平穩搖動,室溫2hr。
3、棄包被液,用0.01MPBS洗膜,5min×3次。
4、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋,液體必須覆蓋膜的全部),4℃放置12hr以上。陰性對照,以1%BSA取代一抗,其余步驟與實驗組相同。
5、棄一抗和1%BSA,用0.01MPBS分別洗膜,5min×4次。
6、加入辣根過氧化物酶偶聯的二抗(按合適稀釋比例用0.01MPBS稀釋),平穩搖動,室溫2hr。
7、棄二抗,用0.01MPBS洗膜,5min×4次。
8、加入顯色液,避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。
三級甲等綜合醫院國營
北京協和醫院是集醫療、教學、科研于一體的現代化綜合三級甲等醫院,是國家衛生健康委指定的全國疑難重癥診治指導中心,最早承擔高干保健和外賓醫療任務的醫院之一,也是高等醫學教育和住院醫師規范化培訓國家 級
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錦江春色來天地,玉壘浮云變古今。在中國歷史文化名城成都市錦江萬里橋頭的華西壩,有一座聞名遐邇的醫學城,她就是四川大學華西臨床醫學院/華西醫院。追溯歷史,華西醫院起源于美國、加拿大、英國等國基督教會1
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從事兒內、急救專業近四十年,具有豐富的危重癥及疑難雜癥搶救治療經驗。特別擅長各種休克、中毒、抽搐等
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從事眼科臨床工作40余年,具有極豐富的臨床經驗及診治疑難眼病的能力,尤其擅長青光眼的早期診斷及難治
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李晶,女,1962年12月生,漢族,陜西人。1985年畢業于新疆醫學院醫療系,學士學位。畢業后分配
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1965年畢業于新疆醫學院臨床醫療學,擅長內科心血管疾病的診斷與治療,曾獲自治區優秀專家稱號。全國
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