三級(jí)甲等綜合醫(yī)院國(guó)營(yíng)
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級(jí)甲等醫(yī)院,是國(guó)家衛(wèi)生健康委指定的全國(guó)疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國(guó)家 級(jí)
一.吲哚試驗(yàn)
方法:以接種環(huán)接種待試細(xì)菌的新鮮斜面培養(yǎng)物于鄧亨氏蛋白胨溶液中,37℃培養(yǎng)24~48小時(shí)后(可延長(zhǎng)4~5天)。于培養(yǎng)液中加入戊醇或二甲苯2~3ml,搖勻,靜置片刻后,沿試管壁加入試劑2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液體變紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)。
也可將一指頭大的脫脂棉,滴上兩滴歐立希氏試劑,再在同處加滴兩滴高硫酸鉀(K2S2O4)飽和水溶液,置于含培養(yǎng)液的被檢試管中,離液面約半寸,置燒杯內(nèi)水浴煮沸為止,脫脂棉上出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。此法略繁,但省試劑且準(zhǔn)確,因?yàn)閷⒃噭┘拥揭后w中,吲哚和糞臭素均呈陽(yáng)性,而用此法,只是吲哚(它能揮發(fā))呈陽(yáng)性反應(yīng)。
亦可以濾紙片浸濕1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%濃HCl溶液,然后以接種環(huán)刮取一環(huán)瓊脂的純培養(yǎng)物涂布于該濾紙上。
細(xì)菌涂印周?chē)仕{(lán)色者為陽(yáng)性,細(xì)菌涂印周?chē)鸁o(wú)色澤變化或淡黃色者為陰性。
二.淀粉的水解
淀粉在酸的催化作用下,能發(fā)生水解;淀粉的水解過(guò)程:先生成分子量較小的糊精(淀粉不完全水解的產(chǎn)物),糊精繼續(xù)水解生成麥芽糖,最終水解產(chǎn)物是葡萄糖。
對(duì)劑:碘化鉀2g蒸餾水300ml
培養(yǎng)基:將細(xì)菌接種在平板上,置37度溫箱中培養(yǎng)24h,加革蘭氏碘液于菌落上,觀察顏色變化,呈藍(lán)色者為陰性,無(wú)藍(lán)色為陽(yáng)性。
三.β-半乳糖苷酶試驗(yàn)
試劑:0.75MONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸餾水中,在加入緩沖液(6.9gNaH2P04溶于45ml蒸餾水中,用30%NaOH調(diào)整pH為7.0,再加水至50ml)5ml,置4℃冰箱中保存。
方法:取純菌落用無(wú)菌生理鹽水制成濃的菌懸液,加入0.25mlONPG液,置35℃水浴20min至3h,觀察結(jié)果。
結(jié)果判定:通常在20~30min內(nèi)顯色。出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)。
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