三級甲等綜合醫(yī)院國營
北京協(xié)和醫(yī)院是集醫(yī)療、教學(xué)、科研于一體的現(xiàn)代化綜合三級甲等醫(yī)院,是國家衛(wèi)生健康委指定的全國疑難重癥診治指導(dǎo)中心,最早承擔(dān)高干保健和外賓醫(yī)療任務(wù)的醫(yī)院之一,也是高等醫(yī)學(xué)教育和住院醫(yī)師規(guī)范化培訓(xùn)國家 級
(1)用0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋t-PA抗體。
(2)用稀釋緩沖液稀釋抗體-POD結(jié)合物。
(3)用基質(zhì)緩沖液溶解鄰苯二胺(8mg/ml),并加入10μl30%H2O2。
(4)將t-PA標(biāo)準(zhǔn)倍比稀釋成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125IU/ml。
(5)標(biāo)本稀釋:1份檸檬酸鈉抗凝血漿加5份稀釋液。如果估計t-PA值增高,血漿作1∶10稀釋。
(6)用稀釋之t-PA抗體包被ELISA反應(yīng)板,每孔200μl,溫育過夜,然后用洗滌液洗3次。
(7)加標(biāo)準(zhǔn)/標(biāo)本200μl,溫育1h后,同上洗滌3次。
(8)加過氧化物酶抗體復(fù)合物200μl,溫育1h后,同上洗滌3次,洗后立即加基質(zhì)。
(9)每孔加基質(zhì)200μl,顯色10~15min。
(10)加硫酸(3mol/L)50μl或鹽酸(1mol/L)100μl,10min中止反應(yīng),于492nm,2h內(nèi)比色,以稀釋緩沖液為本底。
(11)據(jù)吸光度讀數(shù)由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得t-PA含量。
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