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血清鈣

血清鈣注意事項(xiàng)

(1)甲基百里香酚藍(lán)比色法(MTB)：

①M(fèi)TB與EDTA有相似的氨羧結(jié)構(gòu)，能螯合多種陽離子，但絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)不同。

②加入：EDTA的作用，目的在于掩蔽試劑中污染的鈣以及其他的金屬離子。能降低空白管吸光度，提高測定管吸光度，從而使方法靈敏度提高。

③EDTA的用量選擇，絕大部分金屬離子與EDTA的絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)大于鈣，小于鈣的僅是少數(shù)微量元素。限量的EDTA僅能掩蔽試劑中的干擾元素，沒有多余的EDTA絡(luò)合血清鈣，一般加入配試劑中的濃度EDTA99～108μmol/L，最終絡(luò)合顯色反應(yīng)的EDTA濃度50～54μmol/L。

④所用的試管清洗后用去離子水浸泡兩次，再烤干備用。清潔管加入試劑后應(yīng)顯一致的淺灰綠色，若顯藍(lán)色則試管表示有鈣污染。

(2)鄰甲酚酞絡(luò)合酮直接比色法：

①本測定用血清或肝素抗凝血漿標(biāo)本。不能用鈣螯合劑(EDTA-Na2)及草酸鹽作抗凝劑的標(biāo)本。

②鄰甲酚酞是一種酸堿指示劑，在結(jié)構(gòu)上與甲基百里香酚藍(lán)相似，在中性或酸性環(huán)境中無色，僅在堿性溶液中和鈣離子絡(luò)合呈紫紅色。所以pH對顯色有很大的影響，在pH10.5～12時，此反應(yīng)敏感性最好，故用pH11為宜。

③試劑中加入8-羥基喹啉消除鎂的干擾，能特異地絡(luò)合鎂，TritonX-100具有消化蛋白的影響。有的作者，在試劑中還加入氰化物掩蔽其他金屬離子;二甲亞砜消除蛋白影響及抑制鄰甲酚酞絡(luò)合物的解離，從而降低空白液的吸光度;聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白質(zhì)、膽紅質(zhì)及磷的干擾。

④用來作血清鈣測定的堿性緩沖液較多，可根據(jù)條件選用，常用的有乙二胺-氰化鉀、乙二胺-醋酸鉀-鹽酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。用乙二胺-乙二醇緩沖液測定呈色穩(wěn)定。乙醇胺-硼酸緩沖容量較大，并能使空白試劑的吸光度保持較低讀數(shù)。2-氨基-2-甲基-1-丙醇無毒，無刺激性，也能使空白管有較低的讀數(shù)。

⑤顯色劑有時略有結(jié)晶析出，是8-羥基喹啉在水中溶解度很低，易析出結(jié)晶所致，這時可取上清液應(yīng)用。

(3)乙二胺四乙酸二鈉滴定法

①測定標(biāo)本若有黃疸或溶血時，終點(diǎn)不易觀察，則必須將標(biāo)本進(jìn)行處理，首先用草酸鹽將鈣沉淀，再用鹽酸及檸檬酸鈉重溶。

A.尚需增加幾種試劑：0.7mol/L草酸銨;0.05mol/L檸檬酸鈉;1mol/L鹽酸。

B.按下法操作：吸取血清0.1ml，置于離心管中，加去離子水0.25ml、0.7mol/L草酸銨0.05ml，混勻。置56℃水浴中15min。離心沉淀2000轉(zhuǎn)/分10min。小心傾去上清液，并將離心管倒立于濾紙上吸干。加1mol/L鹽酸及0.05mol/L檸檬酸鈉各0.1ml于離心管中，溶解沉淀。按直接滴定法進(jìn)行滴定及計(jì)算。

②鈣指示劑種類繁多，名稱較亂，不同指示劑所顯滴定終點(diǎn)不同，受其他離子干擾的作用也不一樣，鈣紅指示劑終點(diǎn)明顯，且較少受鎂離子等干擾。但本身不穩(wěn)定。要經(jīng)常新鮮配置，加入標(biāo)本內(nèi)后要立即用EDTA-Na2滴定。所用鈣紅為鈣-羧酸鈉，應(yīng)與乙二醛縮雙鄰氨基酚的別名“鈣紅”相區(qū)別。

(4)離子鈣測定：

①測定離子鈣最好用血清。優(yōu)點(diǎn)不參入抗凝劑，減少蛋白對電極的污染。肝素抗凝全血亦可用于離子鈣測定，尤其急需要結(jié)果減少了凝血時間和離心分離血清的時間。但過量的肝素(30u/ml)能使離子鈣濃度降低3%～5%。

②pH改變對Ca2+影響較大。pH降低能使Ca2+增加，反之能使鈣離子減少，故采到的血標(biāo)本盡可能防止CO2逸出，避免pH增加。

③標(biāo)本應(yīng)盡快測定，最好在采樣后1h內(nèi)完成。全血密封貯存于4℃冰箱可穩(wěn)定6h或更長些時間。密封在注射器中的血清，若無氣泡存在，室溫可保存1～2h，4℃可保存24h以上。

④離子鈣含量還與下列因素有關(guān)：

A.站立能使離子鈣增高約1%～2%。

B.延長靜脈淤血的時間能使離子鈣增加2%，淤血時前臂運(yùn)動幾分鐘離子鈣可增加8%。

C.臥床3～12天足以使離子鈣超出正常范圍。

血清鈣不宜人群

無禁忌人群。

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